利多卡因凝胶 [利多卡因微乳凝胶剂的制备及初步药效学探究]

利多卡因微乳凝胶剂的制备及初步药效学探究

1 仪器和材料 1.1 仪器 GG T1000 型电子天平(美国双杰兄弟集团有限公司);SY-1210 型数显恒 温水浴槽(美国精骐集团有限公司);Zetasizer Nano-ZS90 马尔文激光粒度仪(英国 马尔文仪器有限公司);日立H-7650透射电子显微镜[日立高新技术(上海)国际贸 易有限公司];XS105 型分析天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司];DF-101S 集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市予华仪器有限公司)。

1.2 材料与试剂 利多卡因原料药(武汉远成共创科技有限公司，批号：20130902，HPLC 含 量：99.41%);卡波姆940(青岛天力源生物科技有限公司);盐酸利多卡因原料药(中 国食品药品检定研究院，批号：100341-201403);油酸乙酯[阿拉丁试剂(上海)有限 公司];聚山梨酯-80(上海凌峰化学试剂有限公司);无水乙醇(成都市科龙化工试剂 厂);3%硫化钠(天津市北辰方正试剂厂);水为去离子水。

1.3 动物 ICR 小鼠，♀，体质量(22.01.7)g，采购自浙江省医学科学院，许可证号：
SCXK(浙)2014-0001。新西兰大白兔，♀♂各半，体质量(2.20.1)kg，采购自浙江省农业科学院，许可证号：SCXK(浙)2010-0047。

2 方法 2.1 利多卡因微乳、微乳凝胶的制备 2.1.1 利多卡因微乳的制备 根据前期预试验确定了利多卡因微乳的处方 和制备方法，利多卡因微乳的处方为4%油酸乙酯，15%聚山梨酯-80，9%无水乙 醇，70%去离子水，2%利多卡因。按处方配比将利多卡因先加入油相油酸乙酯、 表面活性剂聚山梨酯-80 和助表面活性剂无水乙醇中溶解，在室温下采用磁力搅 拌器边搅拌边缓慢滴加水到含药相中，300 rmin - 1 恒速搅拌至澄清透明，即得 澄清透明的2%利多卡因微乳。

2.1.2 利多卡因微乳凝胶剂的制备 根据2.1.1项下方法制备得到微乳，然后 再加入0.5%卡波姆940 至微乳中，待其充分溶胀后，搅拌均匀即得白色透明的利 多卡因微乳凝胶。

2.2 利多卡因微乳粒径的测定和透射电镜形态观察 采用马尔文Zetasizer Nano-ZS90 激光粒度仪，在25 ℃下对利多卡因微乳 进行粒径及其分布测定。透射电镜形态观察：采用负染色法制备样品，滴1 滴含 药微乳液滴于覆有Formvar 膜的铜网上，自然晾干30 min，再滴加2%磷钨酸1 滴， 自然晾干10 min，用滤纸吸走多余的液体，置于日立H-7650 透射电子显微镜下 观察微乳的形态。

2.3 利多卡因微乳凝胶剂对小鼠热痛模型的镇痛作用 ICR 小鼠经适应性饲养后，进行痛阈值的筛选。先使水浴槽水面接触热 板，调节恒温装置，使水温控制在(55.00.5)℃，热板恒温30 min。每次置1 只小 鼠于热板上，小鼠自放在热板上至出现舔后足所需时间作为该鼠的痛阂值。剔除 舔后足时间5 s 或30 s 或跳跃者。

将初试合格的小鼠，重新称重，随机分为6组，每组10 只，分别为空白对 照组，凝胶组(2%利多卡因)，溶液组(2%盐酸利多卡因)，微乳凝胶低、中、高剂 量组(利多卡因微乳凝胶含量分别为1%，2%，4%)。重复测定其正常阈值，取3 次 的平均值作为该鼠给药前痛阈值。每只鼠背部剃毛约1 cm2，每只鼠给药0.15 g， 空白对照组给予清水，给药后分别记录15，30，45，60，90，120 min时小鼠的痛反应(舔后足或抬后足并回头)时间，如小鼠在热板上60 s 无反应，按60 s 计算。

实验数据均采用x s表示，采用 SPSSl3.0 统计软件进行单因素方差分析， 比较给药组均数与空白对照之间的统计学差异。

2.4 利多卡因微乳凝胶剂对家兔皮肤刺激性实验 家兔于受试前24 h 采用3%硫化钠脱去背部脊柱两侧，并以脊柱中线两侧 对称。8 只兔子按♀♂随机分为完整皮肤组与破损皮肤组。损伤皮肤组在去毛处 以无菌针头划井字，以划破表皮不流血为宜，控制左右两侧皮肤的破损程度基本 保持一致。试验采用同体左右侧自身对比法，家兔左侧上部涂抹4%利多卡因微 乳，右侧上部为空白对照，涂抹空白微乳制剂。家兔左侧中部涂抹4%利多卡因 微乳凝胶剂，右侧中部为空白对照，涂抹空白微乳凝胶制剂。家兔左侧下部为空 白区，即未给药区域。

给药方案：采用连续7 d 给药，每只动物单笼饲养，每天取受试物0.5 mL(g) 直接涂布于对应的去毛皮肤上，然后用二层纱布(2.5 cm2.5 cm)和一层玻璃纸覆盖， 再用无刺激性胶布和绷带加以固定，每天贴敷给药24 h，于第8 天用温水洗去残 留受试物，停药后观察3 d，每天观察涂抹部位有无红斑和水肿等情况。

观察指标：对于以上观察结果，按皮肤刺激反应评分标准进行刺激反应评 分，皮肤刺激反应评分标准如下：无红斑0 分，轻度红斑(勉强可见)，1 分，中 度红斑(明显可见)2 分，重度红斑3 分，紫红色红斑到轻度焦痂形成4 分;无水肿 0 分，轻度水肿(勉强可见)1 分，中度水肿(明显隆起)2分，重度水肿(皮肤隆起1 mm，轮廓清楚)3 分，严重水肿(皮肤隆起1 mm 以上并有扩大)4 分，最高总分 值8 分。计算出各组平均分后，按皮肤刺激强度评分标准进行皮肤刺激强度评价， 皮肤刺激强度评分标准如下：0~0.49，无刺激性;0.5~2.99，轻度刺激性;3.0~5.99， 中度刺激性;6.0~8.0，强刺激性。

3 结果 3.1 利多卡因微乳的粒径与外观 按2.2项下方法测得利多卡因微乳的粒径100 nm，采用激光粒度仪测得的 平均粒径为(66.8316.27)nm，聚分散指数为0.1180.025，粒径分布图。利多卡因微 乳电镜照片，可见，所得的微乳形态规整，几呈球形，粒径多在70 nm 左右。3.2 利多卡因微乳凝胶剂对小鼠热痛模型的镇痛作用 利多卡因微乳凝胶剂各剂量组均能明显抑制热板所致的小鼠足痛，延长痛 阈值，微乳凝胶中、高剂量组在15，30，45，60，90 min 时，与空白对照组和 溶液组比较差异均具有统计学意义(P0.05)，其中在45 min 和60 min 时与凝胶组 比较，差异均具有统计学意义(P0.05)。

3.3 利多卡因微乳凝胶剂对家兔皮肤刺激性影响按2.4 项下皮肤刺激反应 评分标准评价，观察家兔涂抹部位的红斑和水肿情况，各组皮肤评分及强度评分 结果。利多卡因微乳对正常完整皮肤有轻度刺激性，利多卡因微乳凝胶剂对正常 完整皮肤没有刺激性，利多卡因微乳及微乳凝胶对破损皮肤均有轻度刺激性。

4 讨论 本研究通过踏板法实验来考察利多卡因微乳凝胶制剂的镇痛作用。镇痛实 验表明，低、中、高剂量的微乳凝胶均能剂量依赖性地提高小鼠痛阈值，并且在 相同给药量下，中、高剂量的微乳凝胶在45 min 和60 min 时与空白对照组、凝 胶组(2%利多卡因)、溶液组(2%盐酸利多卡因)比较差异均具有统计学意义(P0.05)， 以上结果表明中、高剂量的微乳凝胶的镇痛效果较凝胶好。这主要由于微乳凝胶 不仅提高了微乳的黏度，改善微乳与皮肤的黏附性和涂展性，还增加了局部滞留 时间和药物的经皮渗透量。

皮肤刺激性实验结果表明，高剂量的微乳对正常完整皮肤有轻度刺激性， 高剂量的微乳凝胶对正常完整皮肤没有刺激性，但高剂量的微乳及微乳凝胶对破 损皮肤均有轻度刺激性，这表明利多卡因微乳凝胶有更好的安全性。原因是微乳 凝胶可克服微乳因水分易蒸发导致表面活性剂浓度升高，皮肤刺激性增强。

综上所述，利多卡因微乳凝胶局部外用制剂表现出较好的镇痛作用，表明 利多卡因经皮吸收效果良好，开发其为一种局部经皮给药制剂具有一定的临床应 用价值。