胃癌中MMP9和RAB5A的表达_胃癌

胃癌中MMP9和RAB5A的表达

1 资料与方法 1.1 临床资料 收集河北医科大学附属第二临床医院2004年10月～2005年10月间手术切 除的胃癌标本46例，其中男性35例，女性11例，在院期间年龄最大85岁，最小27 岁，平均年龄56.44岁；
收集外伤和良性溃疡标本12例作为对照。均经4g/l甲醛固 定，石蜡包埋，4μm连续切片，he染色病理确诊，所有患者术前均未接受放、化 疗。

1.2 实验方法 应用免疫组织化学sp染色法。一抗分别为小鼠抗人mmp  9单克隆抗体和 兔抗人rab5a单克隆抗体，购自美国santacruz公司。sp试剂盒和dab染色试剂盒均 购自北京中山生物技术有限公司。sp染色主要步骤参考试剂盒说明进行，光镜下 观察结果。用已知阳性切片作为阳性对照，pbs代替一抗作为阴性对照。

www.lw881.com 1.3 结果判断 只有明显胞浆染色的细胞被判定为正常染色；
如染色不连续，明显减弱或 缺失，则被评定为不正常染色。染色阳性结果判断：染色定位于胞膜和（或）胞 浆并行定性分析。按染色阳性细胞数分ⅳ级计分：阴性为0分（－），0%＜y≤25% 为1分，25%＜y≤50%为2分，50%＜y为3分；
染色强度计分（分四级）：染色无 色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；
采用阳性强度积分与阳性 数量积分相加，阳性强度上，阳性细胞在阳性数目上所占比例（y）：染色强度 积分与阳性数量积分相加，0分为（－），2分为（+），3～4分为（++），5～6 分为（+++）。本试验将（－）和（+）记为阴性结果，将（++）和(+++)记为阳 性结果。1.4 统计学方法 应用spss13.0统计学软件。χ2检验分析各研究对象间mmp  9、rab5a的表 达差异，p＜0.05为差异有统计学意义， mmp  9和rab5a之间的相关性用spearman 等级相关分析。

2 结果 2.1 mmp  9在胃癌原发灶中和癌旁3.0cm组织中的表达 mmp  9在胃癌原 发灶中表达明显增高[1]。mmp  9在癌旁3.0cm组织中的表达增高，与原发灶中 的表达差异无统计学意义，见表1。mmp  9在胃癌组织中的表达与年龄、性别、 肿瘤大小差异无统计学意义；
与组织学类型，侵及范围，淋巴结转移差异有统计 学意义，见表2。表1 mmp  9 和rab5a在不同部位的表达情况 组别例数mmp  9rab5a阳性数阳性率%阳性数阳性率%胃癌组① 463882.613678.26癌旁3.0cm②463065.222963.04正常胃粘膜③120000 mmp  9：①与③比较，χ2=25.208，p=0.001;
②与③比较，χ2=16.211， p=0.001；
rab5a：①与③比较，χ2=21.546，p=0.001;
②与③比较，χ2=15.130， p=0.0012.2 rab5a在胃癌原发灶和癌旁3.0cm中的表达 在胃癌原发灶中rab5a的表 达明显升高。在癌旁3.0cm组织中的表达增高，二者差异无统计学意义，见表1。

rab5a在胃癌中表达与年龄、性别、肿瘤大小差异无统计学意义；
与组织学类型， 侵及范围，淋巴结转移差异有统计学意义，这与相关研究一致[2]，见表2。

2.3 mmp  9和rab5a在正常胃粘膜中的表达 mmp  9在正常胃粘膜（外伤或病理证实为良性表2 mmp  9 和rab5a在胃 癌中的表达与其临床病理特征之间的关系 临床资料例数mmp  9阳性数阴性统计量prab5a阳性数阴性数统计量p年 龄≤55752＞55393360.0940.760433270.9480.330性别男35305女 11830.2870.592278920.0001.000直径 ≥3cm322753cm141130.0030.9562661040.1260.723组织学类型高分化826中低分化 腺癌3836217.7800.0012634412.5800.001浸润范围肌层1275浆膜层 343134.5700.0335731310.0350.002淋巴结转移无1486有 323026.7150.0106830211.9860.001溃疡）中表达阴性，与胃癌原发灶比较差异有统计学意义。rab5a在正常 胃粘膜中表达阴性，与原发灶比较差异有统计学意义，见表1。

2.4 胃癌组织中 mmp  9与rab5a表达的相关性 实验证明mmp  9与rab5a 在胃癌组织中的表达具有正相关性，见表3。表3 mmp  9与rab5a在胃癌组织中的 表达情况 癌组织mmp  9＋－rprab5a＋342－460.5920.000 3 讨论 mmp  9是一种加速肿瘤浸润、转移的蛋白水解酶，其表达量的增加使得 原本均匀、稳定的基底膜和细胞外基质结构被降解破坏，为肿瘤细胞的转移开辟 道路[3]。rab5a作为位于细胞膜、质膜内体的重要蛋白运输和gdp/gtp循环的调控 因子，对细胞的功能起关键性的作用[4]，可引起细胞生长调控紊乱，无限生长、 增殖，最终导致细胞癌变。本次研究发现两者在分化程度较低，有淋巴结转移， 侵及全层的胃癌组织中出现更高的表达，同时mmp  9和rab5a的正相关性可能说 明两者均能促进恶性肿瘤的浸润和转移，两者在肿瘤发生发展的过程中互相促进， 共同加快肿瘤的进展。mmp  9作为金属蛋白酶破坏了基底膜iv型胶原，使基底 膜失去其完整性，这就为肿瘤的转移创造了先决条件， rab5a基因突变引起细胞 生长调控紊乱，无限生长、增殖，从而与mmp  9一起导演了肿瘤从增殖到转移 的过程。与单因素肿瘤研究相比，mmp  9 和rab5a的研究结果为肿瘤的转移机 制研究提供更加全面的思路和方法同时也为肿瘤的诊断和早期治疗提供了依据。

但是肿瘤进展是多个基因以正或负的调节方式协同表达的结果，因此，mmp  9 和rab5a的研究还不足以全面解释肿瘤细胞的发生发展的机制，且两者在共同作 用促进肿瘤进展的具体机制还有待于进一步研究。