【HDAC1和DNMT1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义】 什么是非小细胞性肺癌

HDAC1和DNMT1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

【关键词】 非小细胞肺癌;组蛋白去乙酰化酶;dna甲基转移酶;免疫组 织化学 近年来针对dna甲基化和组蛋白去乙酰化修饰的表观遗传学研究是探 索肺癌发生的新热点。WWw.133229.cOM组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases1，hdac1)是1996年由美国哈佛大学taunto   [1]  发现的第一个哺乳 动物的组蛋白去乙酰化酶，它是多种蛋白质复合物的催化亚单位,参与组蛋白乙 酰化水平的调控。dna甲基转移酶1(dna methyltransferase 1，dnmt1)是体细胞中最 丰富的甲基转移酶,其作用是维持dna甲基化状态   [2]  。两者异常作用导致的 基因组稳定性下降、抑癌基因功能丧失、原癌基因活性增高在多种人体肿瘤的形 成中发挥重要作用。本研究通过免疫组化方法检测dnmt1和hdac1在非小细胞肺癌 组织及癌旁正常肺组织中的表达，并探讨其可能的临床意义，从而为肺癌的早期 诊疗提供新线索。

 1 材料与方法1.1 标本来源  收集我院2008—10~2009—12间住院患者手术切除nsclc标本52例，全 部标本经10%福尔马林固定,石蜡包埋,4μm连续切片,he染色作病变定位,并由两名 病理医师做出病理诊断，所有入选患者手术前均未接受放疗、化疗和免疫治疗, 其中男31例，女21例，小于60岁19例，大于60岁33例;鳞癌30例，腺癌22例;高分 化13例，中分化6例，低分化23例;i~ii期32例，ⅲ~ⅳ期期20例;有淋巴结转移19 例，无淋巴结转移33例。取其中30例远离肺癌组织5 cm以上的正常肺组织作为对 照。

 1.2 主要试剂  兔抗人hdac1多克隆抗体(浓缩型)和兔抗人dnmt1多克隆抗体(浓缩型) 购自北京博奥森公司，s-p试剂盒、dab显色液均购自福州迈新生物技术开发有限 公司。

 1.3 方法  免疫组织化学染色采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法(s-p法)， 用已知阳性切片作阳性对照，以pbs缓冲液代替一抗作阴性对照。具体操作按试 剂盒操作说明进行。

 1.4 结果判定  hdac1和dnmt1均为细胞核阳性表达，染色为棕黄色或者黄色颗粒，采 用二级计分法,阳性细胞计分标准为:≤5%为0分;6%~25%为1分;26%~50%为2 分;51%~75%为3分;75%为4分。染色强度分级计分标准为:无显色为0分;淡黄色为 1分;黄或深黄色为2分;褐或棕褐色为3分，两者计分的乘积≥1者为阳性。

 1.5 统计学处理  所有数据用spss17.0统计软件进行统计分析，组间比较采用  χ  2  检验,相关性分析采用spearman等级相关分析,结果均以  p0.05  为差别有统计学 意义。

 2 结果 〖hth〗2.1 hdac1及dnmt1在肺癌组织及癌旁正常肺组织表达  〖htss 〗hdac1在癌组织及癌旁组织的阳性表达率分别为  59.62%  和36.67%,差异有 统计学意义  (p0.05);
 dnmt1在癌组织及癌旁组织的阳性表达率分别为73.08% 和46.67%，差异有统计学意义  (p0.05)。

 hdac1及dnmt1蛋白在肺癌组织中的表 达均与性别、年龄、肿瘤大小、病理分型及淋巴结转移无关  (p0.05)，  与临床 分期及分化程度有关  (p0.05)。见表1。〖fl)〗〖jz〗〖hth〗 表1 hdac1和dnmt1 表达与临床病例特征之间的关系 〖fl(2k2〗2.2 hdac1和dnmt1蛋白表达的关系  52例肺癌标本中，二者同时表达阳性19例，同时表达阴性者2例，hdac1 阳性dnmt1阴性12例，dnmt1阳性hdac1阴性19例，统计结果显示hdac1与dnmt1在 肺癌组织中的表达呈正相关，相关系数  r= 0.307(χ  2=5.420，  p0.05)。

  3 讨论  近年来的研究表明，肿瘤的发生除了遗传学的改变外，还涉及表观遗 传学的改变，1999年jones   [3]  在《nature genetics》上发表了一篇题为“cancer epigenetics comes of age”的文章，标志着表遗传学成为国际研究的热点。表遗传 学就是研究在dna序列没有改变的情况下，所发生的遗传性基因的表达的改变。

表观遗传分子机制主要包括基因组dna的甲基 化、组蛋白修饰以及基因印迹 等。组蛋白修饰包括乙酰化、甲基化及磷酸化等，其中组蛋白乙酰化修饰是基因 转录调控中 重要的机制。乙酰化水平受组蛋白乙酰化酶和组蛋白去乙酰化酶 的调节。组蛋白乙酰化水平的变化，可改变染色体的结构，影响基因的转录。哺 乳动物hdacs根据酵母同源性分为三类，hdac1属于第一类，它使组蛋白去乙酰化， 与dna紧密结合，染色质呈致密卷曲的阻抑结构，从而抑制基因转录，参与肿瘤 的发生发展。dna甲基化调节基因表达的另一重要方式，基因组总体甲基化水平 低造成的基因组不稳定性以及某些基因cpg岛甲基化程度增高所导致的基因转录 抑制参与了多种肿瘤的发生、发展。新近研究   [4]  发现dnmt及hdac抑制剂在 肿瘤治疗中疗效显著，提示二者在肿瘤研究中的重要价值。本研究应用免疫组织 化学的方法检测肺癌组织及癌旁组织中hdac1和dnmt1蛋白的表达，结果显示 hdac1在肺癌组织及癌旁组织中的阳性表达率分别为59.62%和36.67%，差异有统 计学意义   (p0.05)，   提示hdac1在肺癌中高表达，表明hdac1高表达与肺癌 的发生有关;dnmt1在肺癌组织和癌旁组织中的阳性表达率分别为73.08%和 46.67%，差异有统计学意义(p0.05)。

  hdac1及dnmt1蛋白在肺癌组织中的表达 均与性别、年龄、肿瘤大小、病理分型及淋巴结转移无关   (p0.05)，   与临床分期及分化程度有关  (p0.05)。

 且二者在肺癌中的表达有一定的相关性。有 研究认为在基因转录抑制程序中，dna甲基化是该程序的启动者，而组蛋白乙酰 化是执行者   [5]  。但其在肿瘤发生发展的具体机制如何，尚需进一步研究， 为肺癌的诊治寻找新的思路。