1 材料与方法 1.2 方法 1.2.2 TUNEL检测细胞凋亡 取对数生长期生长良 好的HepG2细胞，将其分别接种于200 mL培养瓶中，细胞贴壁后更换成含终质量 浓度分别为5mg/L和20 mg/L Doxycycline的条件培养液作用24、48和72 h。胰酶 消化各组细胞后，取1滴细胞悬液于已消毒载玻片上，细胞贴壁生长4 h制成细胞 爬片，用1∶1甲醇丙酮固定30 min,保存备用。按TUNEL试剂说明书（Roche）操 作，采用倒置荧光显微镜成像，随机选取5个视野300个细胞计算细胞凋亡率。
1.3 判断标准 FasL、Fas及MMP-2蛋白定位于细胞膜和（或）细胞质，阳性反应为细 胞膜和（或）细胞质内着棕黄色颗粒。免疫组织化学结果判定参照文献［4］， 以阳性细胞百分比及着色强度计分做半定量分析。随机观察5个高倍视野，根据 阳性细胞数占细胞总数的百分比计为0～4分：无阳性细胞为0分，25％为1分，26％ ～50％为2分，51％～75％为3分，75％为4分；
染色的深度以多数细胞的显色反 应为准，着色强度计0～4分：无色为0分，淡黄色为1分，深黄色为2分，棕黄色 为3分，棕褐色为4分。将上述两项指标的评分相加。每张片分别由2个观察者进 行盲法测定，最后取两观察者所得平均值。
1.4 统计学处理 使用SPSS11.0统计软件，多组数据间的比较采用单因素方 差分析或独立样本t检验，P0.05为差异有统计学意义。
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