士的宁是什么 谈不同比例士的宁对马钱子碱体外经皮渗透性质的影响

谈不同比例士的宁对马钱子碱体外经皮渗透性质的影响

研究表明，马钱子制成经皮给药制剂对风湿痹症等具有较好疗效，但其毒 性，尤其是士的宁是亟待解决的问题之一。为达到治疗的增效减毒，本实验利用 体外经皮扩散方法，探讨士的宁与马钱子碱在不同比例下，马钱子碱的经皮扩散 行为，为马钱子的炮制及其经皮制剂的研究等应用方面提供参考依据。

材料 1. 动物 清洁级雄性ICR小鼠30只，体质量(20.03.0)g，浙江省实验动物中心提供， 合格证号：SCXK(浙)2008-0033。

2. 仪器 1200 Agilent高效液相色谱(美国Agilent公司);RYJ-12B药物透皮扩散试验 仪(上海黄海药检仪器有限公司);XS205电子微量天平(瑞士Mettler Toledo公 司);STARTER2100酸度计(美国OHAUS公司)。

3. 试药 马钱子碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110706-200505，纯度 95.9%);士的宁对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110705-200306，纯度 97%);马钱子碱纯品(南京泽朗植提技术有限公司，批号：ZL110116，纯度97.2%);
士的宁纯品(南京泽朗植提技术有限公司，批号：ZL110120，纯度96.2%);马钱子 购于杭州华东中药饮片有限公司，批号：101011，经该公司质检科郑霄鹰主管药 师鉴定为马钱科植物马钱子(Strychnos nux-vomica.L.)的干燥成熟种子;马钱子总生物碱提取物1(自制，批号：20120608，马钱子碱含量94.1%);马钱子总生物碱提 取物2(自制，批号：20120828，马钱子碱含量27.01%，士的宁含量2 6 .95%，总 生物碱含量67.38%)。乙腈(美国Tedia公司，批号：14035045，色谱纯);其他试剂 均为分析纯。

方法 1. 透皮接受液中马钱子碱、士的宁的含量测定方法研究 1.1 色谱条件 色谱柱：Agilent SB-C18柱(4.6mm150mm，5流动相：乙腈-0.01moL/L庚烷 磺酸钠与0.02moL/L磷酸二氢钾等量混合(10%磷酸调pH值为2.80)(21∶79);流 速：1.0mL/min;检测波长：260nm;进样量：20柱温：室温。

1.2 对照品溶液的制备 精密称量马钱子碱、士的宁对照品适量，甲醇溶解，流动相稀释至浓度分 别为38.80、45.20g/mL。

1.3 供试品溶液的制备 取透皮接受液，0.45m微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

1.4 标准曲线 取1.2项下对照品溶液，分别进样5、10、15、20、30、40、50、60L，在 上述色谱条件下进行检测。相应对照品峰面积(Y)为纵坐标，进样量(X)为横坐标 进行线性回归，得到马钱子碱回归方程Y=1 767.7X-39 093，r=0.9999，马钱子碱 在0.194-2.328g内线性关系良好。得到士的宁回归方程Y=2 352.3X-2 9943， r=0.9929，士的宁在0.226-2.712g内线性关系良好。

1.5 仪器精密度试验 精密吸取对照品溶液，连续进样6次，计算峰面积的RSD值分别为0.19%， 0.18%，说明仪器精密度良好。

1.6 重复性试验平行制备供试品溶液6份，进样检测，计算马钱子碱和士的宁的RSD值均 为0.32%。说明此方法的重复性良好。

1.7 加样回收率试验 精密量取已知含量马钱子碱18.79g/mL，士的宁3.57g /mL的上述供试品溶 液6份，每份0.5mL，各加0.2mL混合对照品溶液，流动相定容至2mL，在上述色 谱条件下进行检测，计算回收率，结果见表1。测得马钱子碱和士的宁的平均回 收率为96.74%，99.28%，RSD值分别为0.99%，0.55%(n=6)。说明此方法准确度 良好。

1.8 样品溶液稳定性试验 取上述供试品溶液置于37℃条件下(n=6)，24h后测定含量，马钱子碱、士 的宁的RSD值分别为1.17%和1.52%，表明在37℃条件下透皮接受液中马钱子碱和 士的宁在24h内稳定性良好。

2. 体外经皮吸收实验 2.1 接受介质的配制 称取氯化钠8.00g，氯化钾0.20g，磷酸氢二钠3.63g，磷酸二氢钾0.2 4g， 加蒸馏水溶解定容至1 0 0 0mL，即得pH值7.40磷酸盐缓冲液(PBS)。量取80 0mLPBS加入200mL无水乙醇，混匀，即得20%乙醇的PBS溶液。

2.2 样品溶液的配制 马钱子碱溶液的配制：精密称取马钱子碱纯品适量，接受介质溶解稀释至 浓度为1.56mg/mL。士的宁溶液的配制：精密称取士的宁纯品适量，接受介质溶 解稀释至浓度为0.48mg/mL。马钱子总生物碱提取物1溶液的配制：精密称取马 钱子总生物碱提取物1适量，接受介质溶解稀释至马钱子碱浓度为1.62mg/mL。

马钱子总生物碱提取物2溶液的配制：精密称取马钱子总生物碱提取物适量，接 受介质溶解稀释至马钱子碱浓度为0.829mg/mL，士的宁浓度为0.797mg/mL。按 一定比例吸取上述马钱子碱、士的宁溶液，制得不同比例的纯品组;马钱子总生 物碱提取物1溶液中加入适量马钱子总生物碱提取物2溶液，制得不同比例的提取 物组。2.3 离体皮肤的制备 取雄性健康小鼠，用7%硫化钠溶液(含5%甘油)活体脱去其背部毛发后 0.9%氯化钠溶液洗净皮肤，擦干后饲养12h。处死后剥离背部皮肤，剔除皮下脂 肪和黏连物，0.9%氯化钠溶液洗净，待用。

2.4 离体透皮实验 将小鼠皮肤自然固定在改良的Franz扩散池两室之间，皮肤角质层朝向供 药室，有效扩散面积为2.8cm2，接受室容积为6.5mL。接受室中加入37℃预热的 接受介质，皮肤与接受液间紧密贴合，排尽气泡。供药室中分别加入0.5mL上述 比例的纯品组和提取物组溶液，(37.01.0)℃恒温水浴加热，以600r/min磁力恒速 搅拌。分别于给药后2、4、6、8、10、12、24h取样5mL，并补加5mL 37℃预热 的新鲜接受介质。HPLC法测定马钱子碱，士的宁含量。根据各取样点接受液中 马钱子碱，士的宁含量，计算单位面积药物累积透过量(Q)及稳态渗透速率(J)。

Q计算公式如下：Q=(V0Cn+Vn-1i-1Ci)/A (1)其中Q为单位面积累积透过量(A为有 效透皮吸收面积(cm2);V0为接受液体积(mL);V为取样体积(mL);Ci、Cn为第i(in-1)、 n个取样点测得接受液中药物浓度(g/mL)。并按公式(2)计算累计透过百分率Q%。

Q%=QA/QT (2)其中QT为上样的总药量(g)。

结果 1. 马钱子碱的透皮结果 马钱子碱在纯品组及提取物组中透皮累积渗透曲线。透皮速率及累积透过 百分率。随着士的宁比例的增加，纯品组及提取物中组马钱子碱的J及Q%依次减 小。当比例为1∶0.6，提取物组与纯品组进行比较，Q%明显升高(P0.05)，J增大， 说明可能其他生物碱的存在对马钱子碱的透过有一定的影响。

2 . 士的宁的透皮结果 士的宁在纯品组及提取物组中透皮累积渗透曲线。透皮速率及累积透过百 分率。

讨论 本研究发现：随着士的宁比例的增大，士的宁的J与Q%逐渐升高，而马钱 子碱的J与Q%随之降低。说明提取物或混合物中士的宁均可抑制马钱子碱的透皮吸收性能，且随着士的宁比例的增大抑制效果增强，这与胡巍等[13]报道的结果 有所出入。由马钱子碱和士的宁的结构式可知：其结构和物理化学性质相似，透 皮吸收时产生同质竞争抑制是有可能的。但是，不同实验动物乃至人体皮肤的实 验结果是否也类似，以及具体机制等均需通过进一步实验研究加以确证。此外， 研究结果还表明：马钱子总生物碱提取物中其他生物碱等能够促进士的宁的透皮 吸收。由此证明，马钱子生物碱用于类风湿关节炎治疗时，尽可能降低士的宁的 含量，对增效减毒具有重要意义。马钱子治疗类风湿性关节炎效果显著，但由于 毒性较强极大限制临床应用。本研究的发现可为马钱子的炮制和经皮给药制剂研 究应用等方面提供依据参考。