骨肉瘤吧 RECK及MMP2在骨肉瘤组织中的表达及意义

RECK及MMP2在骨肉瘤组织中的表达及意义

采用 pv  6000免疫组化方法检测reck及mmp  2蛋白的表达。结果 reck在骨肉瘤 组织中低表达(30.0%)，在骨软骨瘤组织中高表达（80.0%）,两者相比差异有显著 性（χ2=5.76,p0.05）；

mmp  2在骨肉瘤组织中高表达(76.7%)，在骨软骨瘤组织 中低表达（10.0%）,两者相比差异有显著性(χ2=11.25,p0.05)；
骨肉瘤组织中reck 与mmp  2的表达呈负相关(r=－0.84,p0.05)。结论 骨肉瘤组织中reck低表达,而 mmp  2高表达。reck及mmp  2可能作为预测骨肉瘤浸润转移的重要指标。

【关键词】 骨肉瘤；
reck；
明胶酶a；
免疫组织化学 expression and significance of reversion  inducing cysteine  rich protein with kazal motifs and matrix metalloproteinase  2 in osteosarcoma wu he, yang chuan  min, dong qian, et al (department of pediatric surgery, the affiliated hospital of qingdao university medical college, qingdao 266003, china) ;
［abstract］ objective to detect the expressions of reversion  inducing cysteine  rich protein with kazal motifs (reck) and matrix metalloproteinase  2 (mmp  2) in osteosarcoma, and explore their correlation with the occurrence, development, invasion, and metastasis of the tumor. methods pv  6000 immunohistochemistry was used to measure the expressions of reck and mmp  2 in 30 samples of osteosarcoma with complete clinicopathological data, and another 10 cases of osteochondroma served as a control. results the expression rate of reck in osteosarcoma was low (30.0%), and that in osteochondroma was high(80.0%), the difference between them being significant (χ2=5.76,p0.05).the expression of mmp  2 in osteosarcoma was high (76.7%), and that in osteochondroma was low (10.0%), the difference between them was also significant (χ2=11.25,p0.05). the expression of reck was negatively correlated with that of mmp  2 in osteosarcoma(r=-0.84,p0.05). conclusion in osteosarcoma, the expression of reck is low, and expression of mmp  2 is high. reck and mmp  2 may be served as important markers to predict the infiltration and metastasis of this malignancy. ［key words］ osteosarcoma;
reversion  inducing cysteine  rich proteinwith kazal motifs;
gelatinase a;
immunohistoche  mistry 骨肉瘤(os)是儿童和青少年最常见的恶性骨肿瘤，其恶性度高，易早期 发生远处转移(尤其是肺转移)，成为病人死亡的主要原因。wwW.133229.coM因 此，探讨os早期侵袭转移机制具有重要的意义。reck基因是新近发现的抑癌基因。

有研究表明,reck是通过负性调节基质金属蛋白酶  2(mmp  2)、mmp  9、膜型 基质金属蛋白酶  1 (mt1  mmp)来抑制肿瘤的侵袭和转移[1  4]。本研究采用免 疫组织化学方法分别检测reck和mmp  2蛋白在os组织中的表达情况,进一步阐明 两者在os发生、发展、浸润和转移中的分子机制,为os的诊断和治疗提供理论依据。

现将结果报告如下。

1 材料与方法 1.1 材料来源 选用我院临床及病理资料完整的os标本30例及骨软骨瘤标本10例,其中 os组中男19例,女11例，年龄6.3～22.0岁，平均13.6岁；
骨软骨瘤组中男6例，女4 例，年龄5.5～12.5岁，平均8.3岁。按enneking分期标准，30例os中ⅰ期8例，ⅱ 期8例，ⅲ期14例。按病理类型划分，骨母细胞型os者14例，软骨母细胞型os者4 例，纤维母细胞型os者3例，毛细血管扩张型os者4例，其他类型者5例。按肿瘤 发生部位划分，股骨14例，胫骨8例，其他部位8例。按有无肺转移划分，无肺转 移12例，有肺转移18例。在获得病理标本前，所有病人均未进行特殊治疗。

1.2 仪器及试剂 浓缩型兔抗人reckmab试剂购于美国santa cruz公司,mmp  2兔抗人mab 购于武汉博士德生物制品有限公司,pv  6000免疫组化试剂盒及dab显色试剂盒 购于北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组织化学染色所需的常规试剂及设备 均由我院病理科提供。

1.3 标本的处理 所有标本均常规脱钙，40 g/l的甲醛溶液固定，石蜡包埋，3 μm厚切片。

采用pv  6000 免疫组化方法检测reck及mmp  2蛋白在os组织及骨软骨瘤组织的表达。一抗工作浓度:reck为1∶100,mmp  2为1∶100。pbs缓冲液代替一抗作 为阴性对照，所有操作均按照说明书严格执行。

1.4 结果判定 reck及mmp  2蛋白阳性信号均呈棕黄色颗粒状，主要位于细胞质内。

高倍镜下观察细胞，随机选取5～10个视野（每个视野观察细胞数不少于200个）， 按阳性细胞所占百分比及着色深浅进行结果判定[5]。①按切片中细胞着色深浅 评分：0分，细胞无显色；
1分，细胞显色浅黄色；
2分，细胞显色棕黄色；
3分， 细胞显色棕褐色。②按阳性细胞数占同类细胞数的百分比评分：30%为1分，30% ～70%为2分，70%为3分，取①、②两项评分的乘积作为总积分，0～1分为阴性 （-），2～3分为弱阳性（+），≥4分为阳性（  ）。

1.5 统计学处理 采用spss 15.0及ppms 1.5[6]统计软件进行统计学处理，计数资料比较采 用χ2检验，以p0.05为差异有显著性。

2 结果 2.1 reck及mmp  2在两组中的表达情况 两组间reck及mmp  2表达阳性率比较差异有显著性(χ2=5.76、11.25， p0.05)。见表1。表1 两种组织reck及mmp  2表达情况（略） 2.2 reck及mmp  2在os组中的表达及与临床病理特征的关系 reck和mmp  2在不同性别、不同病理类型及不同发生部位的os组织中 的阳性表达率比较差异无显著性(p0.05)；
reck和mmp  2在与enneking外科分期及 有无肺转移的os组织中的阳性表达率比较差异有显著性(χ2=5.56～11.29,p0.05)。

见表2。表2 reck及mmp  2在骨肉瘤组织表达及与临床病理特征的关系（略） 2.3 reck及mmp  2的相关性分析os组织中reck与mmp  2的表达呈负相关(r=-0.84，p0.05)。见表3。表3 reck 及mmp  2在os组织中表达的相关性（略） 3 讨论 os是儿童和青少年最常见的恶性肿瘤之一，其恶性程度高，早期转移 （尤其是肺转移）是影响病人治愈率提高的主要因素。因此，探讨os的转移机制 和影响因素对治疗本病及提高病人生存率具有重要的意义。本文分别检测了reck 及mmp  2在os组织中的表达情况，以探讨两者在os发展及转移中的意义。

基底膜和细胞外基质(ecm)是阻止肿瘤侵袭和转移的主要屏障,肿瘤的侵 袭和转移首要条件就是应具备降解细胞外基质和基底膜的能力,这一过程涉及大 量的蛋白酶及其抑制剂,其中基质金属蛋白酶（mmps）家族是基底膜降解过程中 必不可少的酶,几乎能降解ecm中所有的成分和基底膜的胶原,促使肿瘤细胞侵袭 周边结缔组织并进入脉管系统,最后到达其他组织器官。mmps是自然界进化中高 度保守的一类酶, 由20多个锌依赖性内肽酶组成，广泛分布于植物、脊椎动物、 无脊椎动物中,分子大小各异,有一定的底物特异性，是影响肿瘤侵袭和转移的关 键酶。根据底物的不同,主要分为以下几类[7]:胶原酶、明胶酶、基质溶解素、膜 型基质金属蛋白酶及其他类型。有研究结果表明,mmps过度表达与肿瘤的恶性程 度密切相关[7  8]。

reck基因是1998年发现的一种新基因,其在正常组织中高表达,而在各种 肿瘤来源的细胞系及转染了ras等癌基因的细胞中低表达[3,9]。此外基因敲除研究 发现,reck基因还与血管生成密切相关,其适量表达能抑制血管的生成[10  12]。目 前研究结果表明,reck基因能在转录后水平抑制至少3种mmp，即mmp  2、 mmp  9及mt1  mmp,进而抑制肿瘤的血管形成及转移[10  12]。具体作用表现为 膜表面锚定的reck基因抑制mmp  9前体的分泌,而锚定的reck蛋白及可溶性reck 蛋白均可抑制mmp  2、mmp  9及mt1  mmp的活性。

本实验结果显示,reck蛋白在os组织中的表达明显低于在骨软骨瘤组织 中的表达，两组间差异有显著性；
os组中存在肺转移的组织reck表达率明显低于 无肺转移的组织表达率，两组间差异有显著性,即reck在os组织中低表达,并随肿瘤 浸润及远处转移的发生而降低，与kang等[13]报道的结果相符，提示reck基因表 达的缺失与os的发生、发展、浸润和转移密切相关,而且可能为判断os恶性程度提供依据。mmp  2在os组织中的表达明显高于在骨软骨瘤组织中的表达,两组间差 异有显著性,其在os存在肺转移的组织中表达率又明显高于无肺转移的组织表达 率，两组间差异有显著性,即mmp  2在os组织中高表达,并随肿瘤浸润及远处转移 的发生而增高。

本实验结果同时显示，reck和mmp  2在os组织中的表达呈负相关。

mmp  2的表达随reck的降低而升高,提示os组织中reck表达的缺失导致了对 mmp  2的抑制作用降低,而使mmp  2高表达,进而促进了肿瘤细胞的侵袭和转移。

总之,reck和mmp  2的异常表达可能在os的发生、发展和浸润转移过程 中起重要作用,有可能成为判断os生物学行为的重要指标。但其具体机制和途径 目前尚不清楚,需要进行更深入的研究。