胃腺癌组织PI3Kp85α、pAkt及Ki67表达和意义 胃腺癌

胃腺癌组织PI3Kp85α、pAkt及Ki67表达和意义

【关键词】 胃肿瘤 癌基因蛋白质v  mos 蛋白质pakt ki  67抗原 芯片分析技术 expressions of pi3kp85α, pakt and ki  67 in gastric adenocarcinoma jiao xue  fei (department of general surgery, the first people’s hospital of qingdao economic and technical development zone, qingdao 266555, china);
［abstract］ objective to detect expressions of pi3kp85α, pakt and ki  67 in normal gastric mucosa, gastric adenocarcinoma and paraneoplastic tissue by using tissue array. methods the expressions of pi3kp85α, pakt and ki  67 in normal gastric mucosa and gastric adenocarcinoma (with well  differentiated, moderately differentiated, and poorly differentiated) and its paraneoplastic tissue in 30 and 85 cases, respectively, were determined immunohistochemically. results the differences of expressions of pi3kp85α, pakt and ki  67 among normal gastric mucosa, gastric adenocarcinoma and its paraneoplastic tissue were significant (χ2=41.03-57.58;p0.01), and the positive expression rates increased with the advance of the disesease (hc=6.86-13.30;p0.05, 0.01). the differences of the expressions among different grades of differentiations were significant (χ2=18.08-18.90;p0.01), the expressions increased with the increase of the extent of the malignancy. the is a corelation between each two of them in pi3kp85α,pakt and ki  67. conclusion the expressions of pi3kp85α, pakt and ki  67 are closely related to occurrence of the cancer. ［key words］ stomach neoplasms;
oncogene proteins v  mos;
proteins pakt;
ki  67 antigen;
microchip analytical technique胃腺癌病死率居消化系统恶性肿瘤之首。wWw.lw881.com已知ⅰa型磷 脂酰肌醇3  激酶（pi3k）/akt信号传导通路异常活化与多种恶性肿瘤的发生、发 展密切相关，但其活性异常是否是胃腺癌发生、发展的重要因素，目前尚不清楚。

pi3k家族中，能被细胞表面受体传递的生物调控信号激活者为ⅰ型pi3k，ⅰ型pi3k 又分为ⅰa和ⅰb两个亚型。由pi3kr1基因编码的pi3kp85α是ⅰa型pi3k的调节亚基 之一[1]，能通过催化akt被磷酸化为有活性的pakt，在激活ⅰa型pi3k/akt信号传导 通路的过程中发挥重要作用。为此，我们采用组织芯片和免疫组织化学技术，检 测了胃腺癌组织、癌旁组织和对照胃黏膜组织中pi3kp85α、pakt和ki  67的表达， 探讨其与胃腺癌发生等的关系。现报告如下。

1 材料与方法 1.1 材料 收集我科2006—2007年手术切除的胃腺癌标本85例，男58例，女27例， 年龄25～78岁。85例胃腺癌中低分化45例，中分化20例，高分化20例。另收集30 例胃溃疡手术病人胃黏膜组织作为非肿瘤对照组，男21例，女9例，年龄19～60 岁。每例标本均经37 g/l中性甲醛固定，常规石蜡包埋制片，并行苏木精  伊红 染色确定诊断。

1.2 组织芯片制备 用上述组织标本的蜡块制备组织芯片2张，每张芯片包括100个直径1 mm的样点，其中胃腺癌样点85个，对应癌旁组织样点85个，对照胃黏膜组织样 点30个。组织芯片制备委托陕西超英生物科技有限公司完成。

1.3 免疫组化染色 组织芯片经枸橼酸高温高压法进行抗原修复后，采用envision二步法 分别进行pi3kp85α（1∶100）、pakt（1∶100）及ki  67（1∶100）的免疫组织 化学染色。鼠抗人pi3kp85α和ki  67单克隆抗体及兔抗人pakt多克隆抗体均购自 santa cruz公司，山羊抗兔hrp标记二抗、马抗小鼠hrp标记二抗和dab显色试剂盒 购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.4 结果观察在装有目镜网格测微尺(6 400 μm2)的400倍视野下计数8个网格中 pi3kp85α、pakt及ki  67蛋白阳性和阴性的细胞数，按各种阳性细胞占所得细胞 总数的百分比，将其分为4个等级：-，无阳性细胞；
+，阳性细胞30%；

 ，阳 性细胞占30%～60%；

 ，阳性细胞60%。

1.5 统计学处理 采用spss 11.5及ppms 1.5[2]统计软件，用χ2检验、h检验、秩和检验及 spearman等级相关对相应数据进行统计学分析。

2 结果 2.1 各组织中pi3kp85α、pakt、ki  67的表达 本文构建芯片脱落点由常规切片予以补充。pi3kp85α、pakt阳性染色定 位于胞浆, ki  67阳性定位于胞核。对照胃黏膜组织中pi3kp85α、pakt、ki  67蛋 白染色阳性者均以+为主，绝大多数染色为-；
癌旁组织中以  ～  为主，呈小灶 或弥漫的棕黄色或棕褐色染色；
胃腺癌组织中以  为主，呈弥漫的棕黄色或棕褐 色染色。对照胃黏膜、癌旁和胃腺癌组织中pi3kp85α、pakt、ki  67的阳性表达 率差异有统计学意义（χ2=41.03～57.58，p0.01）。pi3kp85α、pakt、ki  67蛋白 随病情进展其阳性表达逐步增强（hc=6.86～13.30，p0.05、0.01）。见表1。

表1 不同组织pi3kp85α、 pakt 及 ki  67阳性表达率及阳性等级构成的比较（略） 2.2 高、中、低分化胃腺癌组织pi3kp85α、pakt、ki  67的表达 pi3kp85α、pakt、ki  67蛋白在高、中、低分化胃腺癌组织中阳性染色 呈弥漫棕黄色或棕褐色。pi3kp85α、pakt、ki  67蛋白在高分化、中分化及低分 化胃腺癌组织中的阳性率差异有统计学意义（χ2=18.08～18.90，p0.01），并且 随着恶性程度的升高，其阳性等级升高(hc=15.95～20.10，p0.01)。见表2。表2 不 同分化胃腺癌组织pi3kp85α、pakt及ki  67阳性表达率及阳性等级构成的比较 （略） 2.3 pi3kp85α、pakt及ki  67蛋白表达的相关性分析pi3kp85α、pakt与ki  67蛋白三者的表达均相关（r=0.81～0.86，p0.01）。

3 讨论 研究胃腺癌的发病机制，尽早诊治是治疗该病的关键。现已知ⅰa型pi3k 和其下游分子蛋白激酶b(pkb或akt)所组成的信号通路是胃腺癌发生发展的关键 途径,并且在其他恶性肿瘤如结直肠癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺 癌、非小细胞肺癌、口腔鳞癌中均发现有该通路上的蛋白分子如pi3kp85、pi3kp110、 akt等的突变或过表达[3  4]。ⅰa型pi3k是调节亚基p85和催化亚基p110构成的专 性的异二聚体[1]。pi3kp85α对pi3k的激活是通过pi3kp85α的sh2结构域与受体酪 氨酸激酶（rtk，如egfr）磷酸化酪氨酸残基的结合实现的。当生长因子及其受体 结合后可以导致rtk中酪氨酸的自身磷酸化，从而使p85的sh2结构域发生构象变化， p85/p110募集至细胞膜上的rtk并定位在细胞膜的内表面上；
pi3k一旦在细胞膜内 表面定位即被激活。

本研究中pi3kp85α、pakt在对照胃黏膜组织、癌旁组织及胃腺癌组织中 的阳性率具有统计学差异（p0.01），而且随病情的进展其阳性等级逐步增高 （p0.05），提示ⅰa型pi3k/akt级联反应信号的放大也能导致胃腺癌的发生。pakt 是akt蛋白ser308或thr473磷酸化后的活性形式[5]，既往已有报道pakt阳性的乳癌 及前列腺癌病人的预后较差[6]。最近有文献研究证实胃腺癌组织中pakt的阳性表 达程度与病人的预后呈负相关关系，并且pakt易导致术后病人化疗药物的耐药[7]。

在本研究中，pi3kp85α、pakt蛋白的阳性等级随胃腺癌恶性程度的增高而增高 （p0.01），由此推测联合检测pi3kp85α、pakt两种指标的阳性率也能反映胃腺癌 的恶性程度和预后。ki  67系细胞增殖相关蛋白，在g1、s、g2、m期细胞核中表 达，g0期不表达，能较好地反映肿瘤细胞的增殖活性。本文结果显示，pi3kp85α 与ki  67在胃腺癌中的表达是相关的（p0.01），因此，pi3kp85α与肿瘤的增殖密 切相关。最近研究发现，pi3kp85α是一种独立的信号分子，在细胞胞浆分裂中发 挥重要作用[8]，其促进增殖的机制是否与其在胞质中分裂中的作用有关仍需进一 步研究。齐鲁医学杂志2010年4月第25卷第２期 med j qilu, april 2010, vol.25, no. ２ 由于pi3kp85α、pakt和ki  67在胃腺癌及癌旁组织中的阳性率及阳性等 级构成比高于对照胃黏膜组织（p0.05），并且3种蛋白在胃腺癌中具有明显的相 关性，因此当3种蛋白阳性率同时升高时胃腺癌的发生概率增加。总之,本研究证明ⅰa型pi3k/akt信号通路级联反应地放大与胃腺癌的发生密切相关，同时 pi3kp85α蛋白作为激活该通路的必要环节，为我们提供了一个新的治疗胃腺癌的 靶点。